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技術方案

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柱前衍生法分析小分子肽樣品中氨基酸含量

2023-01-10

小分子肽是介于氨基酸與蛋白質之間一種生化物質,它比蛋白質分子量小,又比氨基酸分子量大,是一個蛋白質的片段。在人體內(nèi)起重要的生理作用,大家都知道,控制疾病的源頭就是保證細胞的營養(yǎng)充足,而小分子肽是人體最易被細胞吸收利用的化合物之一。依利特使用EClassical 3200液相色譜儀匹配經(jīng)典的Elite AAK氨基酸分析專用色譜柱,對樣品中的含量進行分析檢測。


實驗方法

樣品預處理方法:

樣品溶液配制:分別稱取大豆肽、玉米低聚肽、II型膠原蛋白肽加水5ml溶解,分別放入50ml 離心管中,加乙腈25ml作為沉淀劑,搖勻。離心機 10000r/min、15分鐘。取上清液20ml至50ml容量瓶中,加緩沖液定容(衍生緩沖液固體組分B 4.1g,加水約950ml,用冰醋酸調(diào)PH至6.4-6.8,加10mlN,N-二甲基甲酰胺,加水定容至 1000ml)。從中取10ml至50ml試劑瓶中,加5ml 衍生化溶液,用封口膜封口,暗處60°C水浴 60min,放冷至室溫,用緩沖液定容。過濾后進樣10ul。



色譜條件及配置



實驗結果

18種氨基酸混合溶液圖譜:


樣品成分表:




大豆肽溶液圖譜:

大豆肽成分表:

玉米低聚肽溶液圖譜:

玉米低聚肽成分表:


II型膠原蛋白肽溶液圖譜:

II型膠原蛋白肽成分表:

從上圖及結果可知,大豆肽游離氨基酸總量每克中含3.16mg、玉米低聚肽游離氨基酸總量每克中含 2.19mg、II型膠原蛋白肽游離氨基酸總量每克中含 0.22mg。Elite AAK氨基酸分析專用色譜柱,搭配依利特最新款的EClassical 3200液相色譜儀,滿足定量分析的需求。


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